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TG1电击感受态细胞图片
产品货号:
MQ0033
中文名称:
TG1电击感受态细胞
英文名称:
TG1 Electroporation-Competent Cell
产品规格:
5×50μl|20×50μl
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
TG1电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。TG1来源于E.coli K-12菌株,是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株,在平板上37℃,7 h可见克隆。主要的噬菌体展示用菌株,同时也可用于普通质粒的构建,lacIqZ M15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。
TG1电击感受态细胞适用于噬菌体展示文库的构建,经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>0.5×1010 cfu/μg DNA。
保存条件:-80℃
基因型:
[F´ traD36 proAB lacIqZ M15] supE thi-1(lac-proAB)(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)
操作说明:
1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的TG1电击感受态细胞插入冰中5分钟,待其融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19;
B.对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl,pH7.5;1 mM EDTA)重悬,DNA浓度不超过100 ng/μl,体积不超过5 μl/50 μl感受态。
3.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。
4.启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。
5.2分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入1ml不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温),用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等),向离心管中补加S.O.C.培养基至10 ml。倾斜45度放入摇床,37℃,225 rpm复苏60分钟。
6.5000 rpm离心一分钟收菌,重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。
相关搜索:TG1电击感受态细胞TG1 Electroporation-Competent Cell
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